雪茄烟及其烟叶原料,在存放不当时,均有可能出现霉菌生长的情况。为明确导致某产区雪茄烟叶霉变的元凶,我们尝试开展了以下工作。
首先,选取发生霉菌的烟叶样品一批,置于超净工作台中,用接种环挑取烟叶表面霉菌于PDA固体培养基中,在28℃恒温培养观察。待长出菌落后,并用接种环挑取霉菌接种到PDA中做有规则的划线,经过多次划线得到纯种9株单菌株,其中4株为烟梗表面筛选,5株为叶肉表面筛选。
注:上图为烟梗提取菌株,从左到右,从上到下,依次编号为1~4
注:上图为叶肉提取菌株,从左到右,从上到下,依次编号为5~9
将分离菌株于28℃恒温培养7 d后,收集菌丝体经液氮研磨,高速离心等操作后,进行真菌ITS区PCR扩增回收及序列测定。测序得到分离菌株ITS部分序列,将所得序列通过Blast程序与GenBank中核酸数据进行同源性比对分析。最终,分子生物学鉴定结果如下。
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