烟草在线据云南烟叶信息网站报道 2015年第6期《湖南农业大学学报》刊载的“云产品牌卷烟主体烟叶原料的复烤烟指纹图谱的构建”一文称,利用ISSR引物能够区分复烤烟品种,比照DNA指纹图谱精准鉴别复烤烟品种纯度。
DNA指纹图谱是品质混杂的检测工具,DNA指纹具有高度的个体特异性,分辨率高、稳定可靠,能够准确地鉴定出生物个体和群体之间的差异,甚至可以鉴别出一些基因组中的微小变异,因而是一种理想的品种纯度和真实性检测技术。
该文用红花大金元、云87、NC297、NC102、K326复烤烟品种进行ISSR分析,发现利用826、836、841、847、856 ISSR引物能够区分这5个复烤烟品种。在此基础上,分别利用826和856引物构建了5个复烤烟的DNA指纹图谱,引物826在250-1000bp共读得6个水平的PCR条带,引物856在750-2000bp共读得5个水平的PCR条带。引物826在退火温度为58℃时的指纹图谱为:红花大金元001011,云87100001,NC297011001,NC102001110,K326001001。引物856在退火温度为58℃时的指纹图谱为:红花大金元11000,云8700100,NC29700011,NC10200000,K32600001。上述指纹图谱可以作为5个复烤烟的标准谱带,可作为复烤烟品种的鉴定依据。
该研究指出,在实际操作中,如果需要检测它们是否存在品种混杂的问题,可以通过分别提取复烤烟的DNA、用引物826 或856 在退火温度为58℃进行PCR 反应、电泳检测、照相、与本研究所得到的标准谱带进行比对即可。在其他复烤烟的试验过程中可以参考所筛选得到的引物和相应的退火温度进行ISSR–PCR 反应,进而得到相应品种的指纹图谱,作为后续比对的标准谱带。
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